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放射性免疫检测
概述

    放射免疫检测(radioimmunoassay,RIA)是利用放射性核素的测量方法与免疫反应的基本原理相结合的一种放射性核素体外检测法。该法有灵敏度高、特异性强、精确度佳及样品用量少等优点,因而发展迅速。这种测试技术不仅普遍用于测定具有抗原性的蛋白质、酶和多肽激素,而且越来越广泛地用于测定许多本身无抗原性的药物。

发展

    放射免疫检测技术是开始应用较早的一项标记免疫技术,1959年由美国学者Yalow和Berson利用放射性核素的高敏感性和免疫反应的高特异性而创建。由于放射免疫检测技术的敏感性可高达10-12甚至10-15,线性范围宽(指标),在定量分析上是一次重大的突破,2人因此而荣获1977年诺贝尔生物医学奖。

放射性免疫检测的缺点

    放射性免疫检测技术虽然有很多优点,但也存在不少缺点。
    1、快三彩票首页网址的半衰期段,费用较高,需要用闪烁计数仪等专门的设备;
    2、放射性核素对人体存在着一定潜在的危害性;
    3、试验废物处理困难;
    4、放射性核素标记有时会改变某些生物物质的生理活性。

放射性核素

    1、常用的放射性核素
    放射性核素依据衰变方式分α、β、γ三种,用于放射性标记的有β和γ两类;分别用液体闪烁计数器及γ计数器测定。
    β型:3H(最常用)、14C和32P。
    γ型:125I(最常用)、131I、51Cr和60Co。
    2、125I和3H标记物比较

 项目 125I标记物 3H标记物
 标记方法 方法简便,易获得高比放射性标记物 方法较难,不易获得高比放射性标记物
 对标记化合物影响 标记时以I代替H1改变物质结构,可影响抗原免疫学活性 不改变抗原结构,一般不影响抗原免疫活性
 测量方法 方法简便、效率高 方法复杂、效率低
 测量快三彩票首页网站  γ计数器 液体闪烁计数器
 半衰期 60.2天 约11年
 废弃物 处理容易 较难

    3、放射性核素的选择原则
    高比活度、适宜半衰期、对抗原或抗体没损害、容易标记。
    4、放射性标记的抗原或抗体的要求
    纯度高、灵敏、有足够或完整的免疫活性、高亲和常数、特异性强、交叉反应率低。

放射免疫分析(RIA)与免疫放射分析(IRMA)的区别
放射免疫分析(RIA)是放射性免疫技术最经典的模式。它是以放射性核素标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争性结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析方法。免疫放射分析(IRMA)是用放射性核素标记的过量抗体与待检测抗原直接结合,采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争性放射免疫分析。

    1、标记物:RIA以放射性核素标记抗原;IRMA则是标记抗体。
    2、反应速度:IRMA的反应速度比RIA快。
    3、反应原理:RIA为竞争抑制性结合,反应参数与待检抗原成反相关;IRMA为非竞争结合,反应参数与待检抗原成正相关。
    4、特异性:IRMA特异性教RIA高。
    5、灵敏度和检测范围:IRMA测定的灵敏度明显高于RIA,IRMA标准曲线工作范围较RIA宽1~2个数量级。
    6、其他:RIA所用抗体多为克隆抗体,对亲和力和特异性要求较高,但用量很少;IRMA为快三彩票首页网址过量的反应,对抗体亲和力的要求不及RIA,但用量大。此外,RIA可以测量半抗原,但IRMA只能测定至少有两个以上表位的抗原。